醫(yī)藥職稱論文發(fā)表論正確認(rèn)識(shí)白背葉的化學(xué)成分

　　論文摘要：熔點(diǎn)用Kafler顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定(溫度計(jì)未校正);紅外光譜用EQUINOX55型紅外光譜儀測(cè)定。質(zhì)譜用ZABHS型雙聚焦磁質(zhì)譜儀;核磁共振用VarianINOVA500MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀;柱層析和薄層層析硅膠均由青島海洋化工廠生產(chǎn)。顯色劑為碘蒸氣和5%磷鉬酸乙醇溶液。所用試劑均為分析純。藥材于2004年7月采于廣西金秀縣，由廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院劉基柱老師鑒定為Mallotus apelta。

　　關(guān)鍵詞：白背葉,大黃酚,煙酸,異東莨菪內(nèi)酯,對(duì)甲氧基苯甲酸

　　研究廣西白背葉植物(Mallotus apelta)葉中的化學(xué)成分。方法 利用反復(fù)硅膠柱層析的方法對(duì)廣西白背葉植物葉中的化學(xué)成分進(jìn)行分離和純化，通過(guò)IR、MS、NMR等光譜技術(shù)和化學(xué)方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果 從廣西白背葉中分離得到4個(gè)化合物，經(jīng)鑒定為大黃酚(Ⅰ)，煙酸 (Ⅱ)，異東莨菪內(nèi)酯(Ⅲ)和對(duì)甲氧基苯甲酸 (Ⅳ)。結(jié)論 化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均為首次從該植物中分得。

　　白背葉(Mallotus apelta)為大戟科(Emphorbiaceae)野桐屬植物，又名白面戟、白桃樹(shù)、白面風(fēng)等[1]。味微苦澀，性平，其葉具有清熱利濕、止痛解毒和止血的功效，可用于治療口瘡、跌打損傷、濕疹、外傷出血等，也可用于治療慢性肝炎，對(duì)降低轉(zhuǎn)氨酶和縮小肝脾有一定的作用，另外也可用于治療水腫等疾病。1985年單雪琴等[2]報(bào)道在白背葉根的乙醇提取物中獲得了高根二醇3醋酸酯、二羥基羽扇烷、β谷甾醇和烏索酸乙酸酯4個(gè)化合物。徐一新等[3]也對(duì)白背葉根化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中得到了4個(gè)化合物：Acetyl aleuritolic acid、高根二醇3醋酸酯、東莨菪內(nèi)酯、胡蘿卜苷。程曉芳等[4]對(duì)其根的乙醇提取物進(jìn)行研究，得到18個(gè)化合物：1個(gè)三萜酯類化合物、8個(gè)二萜類化合物、5個(gè)香豆素類化合物、1個(gè)沒(méi)食子酸衍生物、1個(gè)生物堿、1個(gè)谷甾醇類和蔗糖。安天英等[5]從其葉乙醇提取物得到19個(gè)化合物:11個(gè)苯并吡喃類化合物，1個(gè)二肽類化合物，5個(gè)黃酮類化合物，以及對(duì)羥基苯甲醛和β谷甾醇。Phan Van Kiem等[6]從白背葉植物葉的甲醇提取物中分離得到7個(gè)五環(huán)三萜類化合物：3αHydroxyhop22(29)ene、hennadiol、friedelin(木栓酮)、friedelanol(木栓烷醇)、epifriedelanol(表木栓烷醇)、taraxerone(蒲公英賽酮)和epitaraxerol。

　　為了進(jìn)一步研究其藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文對(duì)廣西白背葉植物葉的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從葉中首次分離得到4個(gè)化合物，分別為大黃酚(Ⅰ)，煙酸 (Ⅱ)，異東莨菪內(nèi)酯(Ⅲ)和對(duì)甲氧基苯甲酸 (Ⅳ)。

　　1、儀器與材料

　　熔點(diǎn)用Kafler顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定(溫度計(jì)未校正);紅外光譜用EQUINOX55型紅外光譜儀測(cè)定。質(zhì)譜用ZABHS型雙聚焦磁質(zhì)譜儀;核磁共振用VarianINOVA500MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀;柱層析和薄層層析硅膠均由青島海洋化工廠生產(chǎn)。顯色劑為碘蒸氣和5%磷鉬酸乙醇溶液。所用試劑均為分析純。藥材于2004年7月采于廣西金秀縣，由廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院劉基柱老師鑒定為Mallotus apelta。

　　2、提取與分離

　　取干燥的廣西白背葉10 kg粉碎，粗粉用熱水煎煮3次 ，合并煎煮液，濃縮干燥得到2 kg浸膏，粉碎，用70%(體積分?jǐn)?shù))乙醇溶解濾除不溶物，濾液加2～3倍量水，水浴蒸至無(wú)醇味，依次用氯仿、乙酸乙酯萃取，得到氯仿部位和乙酸乙酯部位。

　　將氯仿萃取物40 g 經(jīng)硅膠(200目)柱層析，用石油醚乙酸乙酯梯度洗脫，TLC監(jiān)測(cè)。其中，石油醚乙酸乙酯(50∶1)流份，用石油醚/乙酸乙酯重結(jié)晶得到化合物Ⅰ(20 mg);石油醚乙酸乙酯(10∶3)洗脫，甲醇重結(jié)晶得到化合物Ⅱ(30 mg);石油醚乙酸乙酯(4∶1)洗脫，用石油醚/乙酸乙酯重結(jié)晶得到化合物Ⅲ; 石油醚乙酸乙酯(10∶1)流份，用石油醚/乙酸乙酯重結(jié)晶得到化合物Ⅳ(20 mg)。

　　3、結(jié)構(gòu)鑒定

　　化合物Ⅰ～Ⅳ的結(jié)構(gòu)式如下：

　　化合物Ⅰ:紅色顆粒，mp197～199 ℃,Borntrager反應(yīng)呈紅色，醋酸鎂反應(yīng)呈橙紅色，示為蒽醌類物質(zhì)。紫外可見(jiàn)區(qū)有5個(gè)吸收峰:235、255、286、308、427，其峰位具有典型的羥基蒽醌類化合物的紫外特征吸收。IRKBr(cm-1)： 1 606，1 568，1 476，1 453應(yīng)為苯環(huán)及其相應(yīng)的彎曲振動(dòng)峰;2 924提示結(jié)構(gòu)中也可能存在甲基;1 677應(yīng)為游離羰基;1 628應(yīng)為締合羰基，證明具1，8二羥基。

　　1HNMR(500 MHz,Acetone)： δ 12.03(1H)和11.93(1H)處于低場(chǎng)，為苯環(huán)上的酚羥基;δ7.82(1H,d,J=8 Hz,H6)，δ7.77(1H,dd,J=8 Hz,J=1 Hz,H5)，δ7.62(1H,t,H4)，δ7.35(1H,dd,J=8 Hz,1 Hz,H7), δ7.19(1H,q,H2)，推斷應(yīng)為蒽醌母核上的phH;δ2.50(3H,s)應(yīng)為與苯環(huán)相連的甲基，處于較低場(chǎng)，因此推測(cè)該甲基與羥基將為間位,而且H2和H4均呈現(xiàn)由于遠(yuǎn)程耦合所致的細(xì)微的多重裂分，也證實(shí)3位甲基的存在;有5個(gè)芳?xì)湟嗾f(shuō)明該化合物為三取代蒽醌。

　　13CNMR (125 MHz Acetone)：δ 192.8和182.1提示存在與苯環(huán)相連的羰基;δ 138.2,125.1,124.9,121.6,120.3 應(yīng)為蒽醌母核上的CH;22.1應(yīng)為與苯環(huán)相連的甲基。EIMS(m/z):254(100%),239,237,226,198,181,152,90,76等;分子離子峰254即基峰與蒽醌類化合物的質(zhì)譜特點(diǎn)相符，主要碎片中有連續(xù)失去CO的226，198，以及失去OH(237)，CH3(239)等取代基的碎片離子，以及由母核骨架208連續(xù)失去CO后(180，152)再裂解產(chǎn)生的雙電荷離子碎片(90，76)。根據(jù)以上光譜分析和質(zhì)譜數(shù)據(jù)推測(cè)化合物1應(yīng)是1，8二羥基3甲基蒽醌，與文獻(xiàn)[7]對(duì)照，發(fā)現(xiàn)其理化數(shù)據(jù)與大黃酚基本一致，鑒定為大黃酚。理化數(shù)據(jù)如下： 1HNMR(500 MHz,Actone):δ： 7.82(1H,q,J=8 Hz,H=7)，7.77(1H,dd,J=8Hz, J=1Hz, H=6)，7.62(1H,s,H4)，7.35(1H,dd,J=8 Hz,J=1 Hz,H5)，7.19(1H,s,H2)，2.50(3H,s,H11)。13CNMR (125 MHz,Acetone)δ:163.1(C1)，125.1(C2)，135.0(C3)，120.3(C4)，132.1(C4a)，124.9(C5)，134.7(C5a)，138.2(C6)，150.9(C7)，163.0(C8)，120.1(C8a)，192.8(C9)，182.1(C10)，22.1(C11)。

　　化合物Ⅱ：白色針狀晶體(甲醇), mp234～237 ℃, IRKBr(cm-1)：1 712提示存在共軛羰基,觀察不到芳環(huán)特征峰。　　13CNMR 和DEPT譜可觀察到4個(gè)CH以及2個(gè)季碳, δ166.2顯示可能存在羧基;δ153.3,150.2,136.9,126.5,123.8提示存在與極性基團(tuán)相連的烯烴基團(tuán)。1HNMR(500 MHz)質(zhì)子信號(hào)出現(xiàn)相互耦合高級(jí)裂分形成的多重峰，因此推斷化合物應(yīng)為環(huán)狀,具有芳環(huán)特征; δ13.38的氫處于如此低場(chǎng)，應(yīng)為羧基;δ7.54的氫與其他氫均有耦合,其中與δ8.27的氫耦合常數(shù)為8,與δ8.79的氫耦合常數(shù)為5,與δ9.07的氫耦合常數(shù)為1;δ8.79的氫與δ8.27的氫耦合常數(shù)為2，耦合常數(shù)如此小，且處于如此低場(chǎng)，與吡啶化合物的氫波譜行為形似，因此可能為以吡啶為母核的化合物。

　　與文獻(xiàn)[8]對(duì)照，發(fā)現(xiàn)與2位或3位羰基取代的吡啶的氫譜基本一致，氫歸屬依次為δ7.54(5H), δ8.27(4H), δ8.79(6H), δ9.07(2H)，因此推定化合物Ⅱ?yàn)轸然〈倪拎?。與文獻(xiàn)[8]的碳譜比較，2位取代吡啶的化合物雜環(huán)上季碳化學(xué)位移在130～140之間，約在135的位置，3位取代吡啶的化合物雜環(huán)上季碳化學(xué)位移在120～130之間，約在126的位置，與13CNMR中季碳126.5接近，因此鑒定為3位取代的吡啶化合物。綜合碳譜和氫譜，推斷分子式為C6H5O2。與文獻(xiàn)[9]對(duì)照，鑒定化合物Ⅱ?yàn)闊熕?。理化?shù)據(jù)如下：1HNMR(DMSO,125 MHz)δ：7.54(5H)，8.27(4H)， 8.79(6H)，9.07(2H)。13CNMR(DMSO,500 MHz)δ：166.2(—COOH)，153.3(C2)，150.2(C6)，136.9(C4)，126.5(C3)，123.8(C5)。

　　化合物Ⅲ：淡黃色針晶(EtoAc),mp205～206.4 ℃，F(xiàn)ABMS給出分子量192，結(jié)合DEPT譜確定分子式為C10H8O4。硅膠薄層色譜在365 nm紫外燈下顯藍(lán)色熒光。 UVλmax(甲醇)：204，224，292，340，顯示有氧取代苯環(huán)和α吡酮環(huán)。IRKBr(cm-1)：3 337，3 024，3 991，3 948，1 700，1 288，1 263，顯示有酯基和苯環(huán)存在。1HNMR(Acetone)譜顯示有一個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)，δ3.91(3H，s)，δ6.17(1H，d, J=9.6Hz)與δ7.83(1H，d, J=9.6Hz)有鄰位偶合關(guān)系，為香豆素特征;δ6.79(1H，s)和δ7.19(1H，s)兩者無(wú)明顯偶合關(guān)系，說(shuō)明為苯環(huán)對(duì)位H,提示該香豆素的6，7位有取代，根據(jù)分子式可知6，7位應(yīng)為甲氧基及羥基取代。13CNMR (125 MHz,Acetone)：δ160.3為香豆素內(nèi)酯環(huán)的羰基;δ 150.2(C6),150.9(C7)與東莨菪內(nèi)酯6，7位的碳化學(xué)位移值明顯不同。綜合以上數(shù)據(jù)，與文獻(xiàn)[10]對(duì)照，鑒定為異東莨菪內(nèi)酯。理化數(shù)據(jù)如下：1HNMR(500 MHz,DMSO)δ: 3.91(3H，s,C11), δ6.17(1H，d, J=9.6 Hz,H3), δ7.83(1H，d, J=9.6 Hz,H4), δ6.79(1H，s,H5), δ7.19(1H，s,H8)。13CNMR (125 MHz,Acetone)δ: 160.3(C2),112.4(C3), 143.7(C4)102.8(C5),150.2(C6),150.9(C7),109.1(C8),145.0(C9)，111.2(C10)。

　　化合物Ⅳ：淡黃色粉末(石油醚/乙酸已酯)，mp165.7～168.7 ℃，易溶于甲醇，溴甲酚綠試劑顯黃色。IRKBr(cm-1):3 500～2 000(br,羧基),2 200～2 000的泛頻峰及1 576,1 603,提示存在苯環(huán)。DEPT譜及1HNMR提示分子中存在1個(gè)CH3，4個(gè)CH ，3個(gè)季碳和1個(gè)羧基，從而推斷分子式為C8H8O3。13CNMR (氘代丙酮):δ 167.398吸收峰證實(shí)共扼羧基的存在，1個(gè)甲氧基信號(hào)是55.837。 1HNMR(氘代丙酮)：δ3.886(3H,s)證明存在1個(gè)CH3;7.0(2H,d), 8.0(2H,d) 為AA′XX′自旋偶合系統(tǒng)，為對(duì)位取代的苯環(huán)質(zhì)子信號(hào)。綜合以上分析，與文獻(xiàn)[11]對(duì)照鑒定為對(duì)甲氧基苯甲酸。理化數(shù)據(jù)如下：1HNMR(Acetone,500 MHz) δ: 3.89(3H,s,H1), 7.02(2H,d,J=8.8 Hz,H3), 7.99(2H,d，J=8.8 Hz,H4)。13CNMR(Acetone,125 MHz) δ: 55.8(C1), 164.3(C2), 114.5(C3), 132.4(C4), 123.8(C5), 167.4(C6) 。

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