川西獐牙菜的研究進(jìn)展

　　摘要：川西獐牙菜為傳統(tǒng)藏藥藏茵陳基原植物之一，綜述其在植被分布、化學(xué)成分、藥理作用、分子生物學(xué)、人工栽培、制劑開發(fā)等方面的研究進(jìn)展。

　　本文源自華西藥學(xué)雜志,2020,35(05):567-571.《華西藥學(xué)雜志》(雙月刊)創(chuàng)刊于1986年，是由教育部主管，四川大學(xué)和四川省藥學(xué)會(huì)聯(lián)合主辦的藥學(xué)類綜合性學(xué)術(shù)刊物。于1988年至今被中國科技情報(bào)研究中心作為科技論文期刊源期刊;1993年起被美國《化學(xué)文載》(CA)收錄;被國內(nèi)《中國藥學(xué)文摘》、《醫(yī)學(xué)文摘》和《中國生物學(xué)文摘》等摘錄，被國內(nèi)各種數(shù)據(jù)庫收錄。2001年入選中國期刊方陣雙效期刊。2003年被評為《CAJ-CD規(guī)范》執(zhí)行期刊。2008年再次被確定為藥學(xué)類中文核心期刊。多次被評為四川省期刊。

　　藏茵陳為傳統(tǒng)藏藥，其基原植物之一的川西獐牙菜SwertiamussotiiFranch.為龍膽科獐牙菜屬一年生草本植物，生于海拔3600～3800m的山坡、灌叢草地、林緣、河灘等，在中國四川、西藏及青海等省區(qū)均有分布[1]。其能清肝利膽、退諸熱，用于治療黃疸型肝炎、病毒型肝炎、血病等癥[2]。近幾年有關(guān)川西獐牙菜的研究進(jìn)展迅速，在植被分布、化學(xué)成分、藥理作用、分子生物學(xué)、人工栽培、制劑開發(fā)等方面都取得了巨大進(jìn)展。現(xiàn)就川西獐牙菜的研究概況作一綜述。

　　1、植被分布研究

　　藏茵陳是治療肝膽疾病的良藥，其原植物分布廣泛、品種眾多，主要來源于龍膽科獐牙菜屬和花錨屬，此外，龍膽科扁蕾屬、肋柱花屬及虎耳草科虎耳草屬的數(shù)種植物也有作為藏茵陳使用，但由于其植株矮小，生長海拔較高，使用較少[3]。四川產(chǎn)川西獐牙菜在海拔1900～4000m均有分布，廣泛分布于甘孜州和阿壩州，多生長在山脊坡上、山腰、草坡、河谷。云南省(以滇西北為主)川西獐牙菜在海拔2500～3000m均有分布，主要分布在德欽，且主要生長在山坡灌叢[3]。文獻(xiàn)探討了川西獐牙菜的適宜生態(tài)因子，得到了川西獐牙菜集中分布區(qū)的生態(tài)因子值為:1月均溫-12.6～0.2℃，3月均溫-6.0～6.0℃，7月均溫8.0～17.8℃，年均溫7.2～16.8℃;年降水量428～875mm;年均日照時(shí)數(shù)1973～2757h;相對濕度51.0%～62.3%;土壤以黑氈土、草氈土、薄草氈土、暗棕壤、棕壤、褐土、灰褐土為主[4]。采取文獻(xiàn)、市場、走訪、樣方等方法，調(diào)查了川西獐牙菜的產(chǎn)地，結(jié)果川西獐牙菜主要分布在西藏的左貢、芒康，青海的玉樹，四川的石渠、道孚、康定、馬爾康、金川、小金等地，在2300～3900m海拔均有分布[5]。文獻(xiàn)通過地理信息系統(tǒng)(GIS)，得到川西獐牙菜在四川省的適宜分布區(qū)域?yàn)榈赂窨h、甘孜縣、道孚縣、康定縣、馬爾康市、金川縣、小金縣、丹巴縣、稻城縣、鄉(xiāng)城縣、新龍縣、阿壩縣、木里縣等縣市，適宜生長區(qū)域占該區(qū)縣市總面積的7.25%，相關(guān)資料以及野外實(shí)地驗(yàn)證調(diào)查發(fā)現(xiàn):通過GIS得到的川西獐牙菜適宜分布區(qū)域與實(shí)際分布情況基本吻合[6]。

　　2、化學(xué)研究

　　2.1化學(xué)成分

　　利用硅膠柱層析法從川西獐牙菜乙醇提取物中分離得到了酮苷類成分，之后又從川西獐牙菜水溶性成分中分離得到環(huán)烯醚萜類、黃酮苷、酮苷等化學(xué)成分[7,8]。近年來，對川西獐牙菜的化學(xué)成分研究有大量報(bào)道，運(yùn)用各種方法分離得到了許多化合物(表1)。

　　2.2含量測定

　　藏藥龍膽科獐牙菜屬植物及提取物藥理活性成分的檢測多為獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、龍膽苦苷等裂環(huán)烯醚萜類化合物，芒果苷等酮類化合物，齊墩果酸等三萜類化合物以及當(dāng)藥黃素、異葒草苷等黃酮類物質(zhì)[17,18]。文獻(xiàn)采用HPLC法對青海不同產(chǎn)地川西獐牙菜中的落干酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷等4種主要成分進(jìn)行了含量測定，方法簡單、準(zhǔn)確、實(shí)用性強(qiáng)[19]。采用RP-HPLC法同時(shí)測定四川及青海產(chǎn)川西獐牙菜中獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷、當(dāng)藥醇苷、異葒草苷、1,8-二羥基-3-甲氧基酮的含量，對評價(jià)藥材質(zhì)量及新藥源的研究具有指導(dǎo)意義[20]。研究建立了川西獐牙菜中獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷、異葒草苷等4種苷類成分含量測定的RP-HPLC法，可作為獐牙菜類藥材的質(zhì)量控制依據(jù)[21]。文獻(xiàn)對15種獐牙菜屬植物中的主要藥用成分獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、苦龍苷等進(jìn)行了HPLC分析，并對這幾種成分的分布進(jìn)行了比較[22]。文獻(xiàn)采用HPLC法測定川西獐牙菜中獐牙菜苷的定量方法，可快速有效地測定獐牙菜苷[23]。文獻(xiàn)建立了測定川西獐牙菜中4種藥用成分獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、芒果苷、齊墩果酸含量的HPLC法，并運(yùn)用該法比較不同海拔川西獐牙菜中4種主要藥用成分的含量變化[24]。研究利用紅外光譜三級(jí)鑒定方法對川西獐牙菜及其不同溶液提取物進(jìn)行分析研究，以期為傳統(tǒng)用藥的合理性和以現(xiàn)代監(jiān)控手段分析傳統(tǒng)藏藥的思路提供依據(jù)[17]。

　　表1川西獐牙菜有效部位的化學(xué)成分分離

　　2.3指紋圖譜

　　指紋圖譜技術(shù)常用于中藥材的鑒別和質(zhì)量評價(jià)。文獻(xiàn)建立了川西獐牙菜甲醇提取部分的HPLC指紋圖譜，可作為該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[25]。利用HPLC法建立了青海川西獐牙菜的色譜指紋圖譜，可用于該藥材的質(zhì)量評價(jià)[26]。有研究建立了川西獐牙菜藥材的1HNMR指紋圖譜，為其質(zhì)量評價(jià)提供了新方法[27]。

　　3、藥理作用

　　3.1保肝利膽作用

　　從川西獐牙菜中分離得到的獐牙菜苦苷可顯著上調(diào)大鼠肝膽汁酸解毒酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，增加疏水膽汁酸的水溶性，消除膽汁酸[28];還能減輕肝損傷、炎癥和膽管結(jié)扎大鼠膽汁淤積，使血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ATL)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)的水平顯著降低，降低血清中腫瘤壞死因子(α-TNF)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)的水平，還可以降低膽汁淤積大鼠體內(nèi)鵝去氧膽酸(CDCA)和脫氧膽酸(DCA)的含量[29]。建立膽道結(jié)扎大鼠模型，觀察川西獐牙菜中分離得到的齊墩果酸對大鼠膽汁淤積性肝損傷的保護(hù)作用，這種保護(hù)作用可能與Lrh-1、Mrp3有關(guān)[30]。川西獐牙菜醇提物可能通過核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2調(diào)節(jié)Mrp4的表達(dá)上調(diào)，從而發(fā)揮減輕膽汁淤積大鼠肝臟損傷的作用[31]。川西獐牙菜醇提物有顯著的抗肝損傷作用，其作用機(jī)制可能與抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)[32]。川西獐牙菜預(yù)防性給藥能減輕免疫性肝損傷對小鼠肝臟的破壞，保護(hù)肝功能[33]。

　　3.2抑菌作用

　　對川西獐牙菜中提取分離得到的1,8-二羥基-3,7-二甲氧基酮進(jìn)行了抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明:該物質(zhì)具有抑菌生物活性，尤其對大腸桿菌的抑菌作用較強(qiáng)[34]。用水蒸氣蒸餾法提取川西獐牙菜中的揮發(fā)油，并對其進(jìn)行抗菌活性研究，結(jié)果表明:川西獐牙菜揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、傷寒沙門氏菌有抑菌活性[35]。

　　3.3抗腫瘤作用

　　從川西獐牙菜中提取分離得到的化合物4,6,8-trihydroxy-1,2,3,5-tetramethoxyxanthone(4,6,8-三羥基-1,2,3,5-四甲基酮)對神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制活性[9]。川西獐牙菜70%乙醇部分對人胃癌細(xì)胞MGC-803裸鼠皮下移植瘤的生長具有抑制作用[36]。

　　3.4抗糖尿病作用

　　對川西獐牙菜中分離得到的川西獐牙菜內(nèi)酯Ⅰ進(jìn)行抗糖尿病的藥理篩選，結(jié)果表明:川西獐牙菜內(nèi)酯Ⅰ有抑制醛糖還原酶的作用[37]。

　　4、分子生物學(xué)研究

　　4.1川西獐牙菜的真?zhèn)舞b定

　　分子生物學(xué)技術(shù)可以較好地解決藏茵陳基原植物的種類鑒定。對藏茵陳各基原物種變異進(jìn)行分析并構(gòu)建了各基原物種遺傳多樣性聚類分析圖，結(jié)果表明:ITS2序列可以作為藏茵陳基原植物的分子鑒別和遺傳多樣性分析的可靠方法[38]。通過對川西獐牙菜轉(zhuǎn)錄組資源的三核苷酸重復(fù)基元SSR信息進(jìn)行研究，為分子水平和生物信息學(xué)角度上開發(fā)川西獐牙菜的SSR功能性標(biāo)記提供了豐富的候選序列[39]。

　　4.2川西獐牙菜的基因克隆

　　環(huán)烯醚萜類化合物龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷等是川西獐牙菜的主要藥效成分，具有利膽退黃、清熱解毒的作用，對治療肝炎、糖尿病效果顯著[40]。這類化合物主要通過甲羥戊酸(MVA)、甲基蘚醇磷酸(MEP)、焦磷酸香葉酯(GPP)等生物合成途徑產(chǎn)生。其中，甲羥戊酸激酶(MK)、1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)、7-脫氧馬錢子酸羥化酶(DL7H)、焦磷酸合成酶(GPPS)、裂環(huán)馬錢子苷合成酶(SLS)等是生物合成的關(guān)鍵酶，在植物萜類合成中起重要作用。從藥用植物川西獐牙菜中克隆得到甲羥戊酸激酶基因MK(SmMK)、1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶基因DXS(SmDXS2)、7-脫氧馬錢子酸羥化酶基因DL7H(SmDL7H)、焦磷酸合成酶基因GPPS(SmGPPS)、裂環(huán)馬錢子苷合成酶基因SLS(SmSLS)，并對其進(jìn)行生物信息學(xué)及原核表達(dá)分析，為探索川西獐牙菜中裂環(huán)烯醚萜類化合物的合成途徑奠定了基礎(chǔ)，為提高川西獐牙菜次生代謝產(chǎn)物有效成分的含量提供了科學(xué)積累[41]。通過分析川西獐牙菜轉(zhuǎn)錄組的數(shù)據(jù)，鑒定出環(huán)烯醚萜類生物合成的3個(gè)代謝路徑相關(guān)的39個(gè)轉(zhuǎn)錄本，可編碼24種酶;對環(huán)烯醚萜類生物合成路徑中相關(guān)基因在不同組織中的表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn):各個(gè)基因在不同組織中的表達(dá)具有顯著差異[42]。

　　5、人工栽培

　　無節(jié)制的采挖使野生川西獐牙菜資源枯竭，引種栽培是解決資源匱乏的重要途徑[43]。川西獐牙菜引種栽培試驗(yàn)表明:種子在自然狀態(tài)下萌發(fā)率較低，經(jīng)低溫處理后可明顯提高萌發(fā)率;栽培川西獐牙菜的植株高度、分枝數(shù)量、單株生物量等生長指標(biāo)明顯高于野生植株，其有效化學(xué)成分可達(dá)到野生水平，說明其人工栽培可行[44]。經(jīng)人工后熟、低溫、吲哚乙酸(IAA)和碳酸鈉(Na2CO3)處理后，種子的萌發(fā)率顯著提高[45]。

　　6、制劑研發(fā)

　　川西獐牙菜作為傳統(tǒng)藏藥，已被開發(fā)為藏茵陳片、藏茵陳膠囊等多種藥物制劑，用于治療急性黃疸型肝炎、急慢性肝炎、肝炎后血膽紅素增高癥等[46]。藏茵陳膠囊對慢性乙型肝炎患者具有較好的治療作用，對患者肝功能的恢復(fù)有明顯效果，對乙肝病毒有抑制作用[47]。

　　7、討論和建議

　　近幾年來，對川西獐牙菜的化學(xué)成分、藥理作用、分子生物學(xué)、組織培養(yǎng)等研究取得了較大成果。目前從川西獐牙菜中分離得到的化合物主要為環(huán)烯醚萜類、酮類、黃酮類及三萜類化合物，而藥理學(xué)研究主要集中在環(huán)烯醚萜類和三萜類化合物，酮類和黃酮類化合物的藥理研究較少，今后應(yīng)深入研究川西獐牙菜的化學(xué)成分，并進(jìn)行藥理活性成分篩選，進(jìn)一步了解物質(zhì)基礎(chǔ)與其臨床療效之間的關(guān)系。目前對川西獐牙菜中有效活性成分的藥理學(xué)研究主要集中在保肝利膽作用，其次是抑菌抗腫瘤作用，其有效化學(xué)成分是否具有其他藥理作用有待研究。今后應(yīng)該以基礎(chǔ)藥理學(xué)研究為切入點(diǎn)，進(jìn)一步從分子生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等方面闡明藥效學(xué)機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。現(xiàn)階段川西獐牙菜的分子生物學(xué)研究主要是對環(huán)烯醚萜類化合物，對其他有效化學(xué)成分的分子生物學(xué)研究較少，今后要深入研究川西獐牙菜中有效成分的生物合成途徑，最終通過體外生物合成路徑進(jìn)行體外合成。此外，還應(yīng)做好藏茵陳基原植物資源的品種調(diào)查和資源保護(hù)工作，深入研究人工組培技術(shù)，以提供市場的大量需求。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]張應(yīng)鵬,楊云裳,劉宇,等.藏藥川西獐牙菜揮發(fā)性化學(xué)成分及抑菌活性研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009,20(3):595-597.

　　[2]青海省衛(wèi)生廳.青海省藏藥標(biāo)準(zhǔn)[M].青海:青海省衛(wèi)生廳,1992.

　　[3]姜海,張浩,彭煥超,等.藏藥蒂達(dá)原植物在四川的地理分布與植物特征[J].華西藥學(xué)雜志,2008,23(1):81-83.

　　[4]黃芳林,段寶忠,丁平,等.藏茵陳生態(tài)適宜性分析與區(qū)劃[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(11):5614-5618.

　　[5]趙紀(jì)峰,劉翔,王昌華,等.珍稀瀕危藥用植物川西獐牙菜的資源調(diào)查[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2014,16(4):845-850.

　　[6]董永波,羅瑤,祝聰,等.遙感和GIS在四川省中藏藥川西獐牙菜適宜性分布研究中的應(yīng)用[J].中國中藥雜志,2017,42(22):4387-4394.

　　[7]孫洪發(fā),丁經(jīng)業(yè).川西獐牙菜中酮成分的分離與鑒定[J].植物學(xué)報(bào),1981,23(6):464-468.

　　[8]孫洪發(fā),胡伯林,丁經(jīng)業(yè),等.川西獐牙菜甙類成分[J].植物學(xué)報(bào),1991,33(1):31-37.

　　[9]石崢,戴宇軒,梁晨,等.川西獐牙菜乙酸乙酯部位的化學(xué)成分及活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2018,30(11):1918-1922.

　　[10]尚軍,井靈,劉葉,等.大孔吸附樹脂結(jié)合硅膠色譜分離川西獐牙菜正丁醇萃取部位化學(xué)成分研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)學(xué),2018,14(7):52-54.

　　[11]曹團(tuán)武,何康,耿長安,等.川西獐牙菜中兩個(gè)新的鏈狀單萜類化合物[J].有機(jī)化學(xué),2016,36(9):2216-2219.

　　[12]陳濤,賈靜,王萍,等.高速逆流色譜分離制備川西獐牙菜中兩種苷類化合物[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2012,24(6):800-803,859.

　　[13]周永福,黃飛燕,文榮榮,等.川西獐牙菜的化學(xué)成分研究[J].云南民族大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2011,20(1):14-16.

　　[14]賈靜,李玉林,趙曉輝,等.高速逆流色譜分離純化川西獐牙菜中3種酮苷元[J].分析化學(xué),2011,39(4):584-587.

　　[15]羅翠婷,毛雙雙,陳河如,等.川西獐芽菜化學(xué)成分研究[J].中草藥,2013,44(8):942-946.

　　[16]袁葉飛,胡祥宇.川西獐牙菜中芒果苷的提取分離研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009,20(8):1840.

　　[17]楊紅霞,馬芳,杜玉枝,等.藏藥川西獐牙菜及其不同提取物的紅外光譜分析[J].光譜學(xué)與光譜分析,2014,34(11):2973-2977.

　　[18]李?yuàn)?呂露陽,劉圓,等.HPLC測定川西高原4種龍膽科植物中的環(huán)烯醚萜苷類[J].華西藥學(xué)雜志,2016,31(5):514-516.

　　[19]盧永昌,林鵬程,李連隆,等.HPLC測定青海不同地區(qū)川西獐牙菜活性成分的含量[J].中成藥,2009,31(10):1558-1559.

　　[20]保怡,吉文鶴,馬玉花,等.HPLC測定四川及青海地區(qū)獐牙菜植物中6種主要成分的含量[J].中國中藥雜志,2006,31(24):2036-2038.

　　[21]靳有才,肖遠(yuǎn)燦,鄒小艷,等.HPLC法同時(shí)測定2種獐牙菜中4種苷類成分[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(7):1889-1890.

　　[22]紀(jì)蘭菊,保怡,陳桂琛,等.15種獐牙菜屬植物中主要藥用成分的高效液相色譜測定[J].西北植物學(xué)報(bào),2004,24(7):1298-1302.

　　[23]張瑩.HPLC法測定川西獐牙菜中獐牙菜苷的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2010,25(2):97-99.

　　[24]楊紅霞,魏立新,杜玉枝,等.不同海拔川西獐牙菜中藥用成分的HPLC分析[J].中藥材,2010,33(6):867-869.

　　[25]吉文鶴,盧學(xué)峰,陳桂琛,等.四川西北地區(qū)川西獐牙菜指紋圖譜研究[J].中國中藥雜志,2005,30(13):977-979.

　　[26]吳啟勛,宋萍,祁米香,等.青海獐牙菜的高效液相指紋圖譜研究[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2006,32(6):1148-1152.

　　[27]范剛,周向東,羅維早,等.川西獐牙菜的1H-NMR指紋圖譜研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,36(3):1-3.