我國轉基因生物檢測技術的應用現狀

　　隨著我國科學技術的發(fā)展，轉基因生物在我國食品中得到了應用，由于其生物安全管理技術性較強，需要我們對我國的轉基因生物檢測技術進行進一步的研究，為轉基因生物檢測的科學性和技術性奠定基礎。當前，在我國的轉基因生物應用過程中，我國常見的轉基因生物檢測技術主要有PRC技術、DNA提取技術等，正規(guī)論文在本文中，我們將對當前我國轉基因生物檢測技術的主要內容進行簡要介紹，以期為我國未來轉基因生物檢測技術的發(fā)展奠定良好的技術基礎。

　　《福建農林大學學報》(哲學社會科學版)主要報道有關農業(yè)、農村和農民問題的最新研究成果，兼顧刊載其他社會科學方面的學術論文，為我國經濟和社會發(fā)展以及高等農業(yè)教育改革服務。獲獎情況：2002年獲中國人文社科學報優(yōu)秀編輯質量社科學報、2003年獲第三屆全國理工農醫(yī)院校優(yōu)秀期刊獎。

　　轉基因技術對于提高作物產量、改善作物品質方面做出了巨大貢獻，也緩解了國際上的糧食危機。隨著轉基因技術的發(fā)展，轉基因生物檢測問題在國內外已經引起極大的關注，不同領域的專家都從自己的專業(yè)角度對這個問題進行了很多研究，主要通過技術層面來分析轉基因生物的安全性問題。下面讓我們共同對國內外轉基因生物檢測技術的發(fā)展現狀進行探索。

　　轉基因技術的理論基礎來源于進化論衍生來的分子生物學，DNA片段被轉入特定生物中，與其本身的基因組進行重組，再從重組體中進行數代的人工選育，從而獲得具有穩(wěn)定表現特定的遺傳性狀的個體。當前應用較為廣泛的轉基因生物檢測技術主要有如下幾種：

　　一、普通PCR聚合酶鏈式反應

　　PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。

　　二、實時熒光PCR技術

　　實時熒光PCR法是目前最有發(fā)展前途的定量檢測方法，也是目前最適合出入境檢驗檢疫的檢測技術之一。所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光集團，利用熒光信號積累，實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。該方法可以有效提高檢測的準確性和靈敏度。它既能做定性檢測，加入標準品也能做定量檢測。

　　三、DNA芯片檢測技術

　　DNA芯片檢測的測序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置的核酸探針產生互補匹配時，通過確定熒光強度最強的探針位置，獲得一組序列完全互補的探針序列。據此可重組出靶核酸的序列。

　　DNA提取的主要方法有如下幾種：

　　1、濃鹽法

　　利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的氯仿一起搖蕩，使其乳化，再離心除去蛋白質，此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來。也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白。兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.。除此之外，還可以用稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑，通常用15MNaCL，0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA。

　　2、陰離子去污劑法

　　用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性，可以直接從生物材料中提取DNA 。由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA。

　　3、苯酚抽提法

　　苯酚作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用。用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA 聯(lián)結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是可以使提取的DNA保持天然狀態(tài)。

　　4、水抽提法

　　水抽提法主要是利用核算溶解于水的性質，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液，在上清液中加入固體氯化鈉調節(jié)至2.6M，加入兩倍體積的百分之九十五乙醇，立即用攪拌法攪出，然后分別用百分之六十、百分之八十和百分之九十五的乙醇以及丙酮洗滌，最后在空氣中干燥，既可以得到DNA樣品，用這種方法提取的DNA蛋白質含量較高，因此一般不會使用。如果為了去除蛋白可將此法進行改良，在提取的過程中加入SDS。

　　四、結語

　　隨著科學技術的發(fā)展，轉基因生物極大緩解了我國的糧食危機。綜上所述，國外轉基因生物檢測技術已經進入發(fā)展的成熟期，取得了驚人的成果，我們應加強與國外的技術合作和交流，建立健全轉基因生物檢測管理體系，加大對硬件設施的投入，加快檢測技術的研發(fā)和推廣，從而完善我國轉基因生物檢測相關法律，并促進我國轉基因生物事業(yè)的發(fā)展。