材料與方法

1.試驗動物與儀器：取健康湛江雞１０只，體質量（１５±０２）ｋｇ，日齡（１１０±５）ｄ。主要儀器為活體微循環觀察顯微鏡（廣州啟躍光電儀器有限公司，增設底部投射光源）。

2.方法：

1）胸腺的血管觀察：將雞窒息處死，靜置１ｈ，待血液在體內凝固。將頸部皮膚從腹側正中劃開，暴露胸腺，整體泡入體積分數為２０％甲醛中固定１ｄ后，血液凝固呈黑色，解剖觀察頸部血管走向及供應胸腺的血管。

2）活體觀察胸腺微循環狀態：試驗動物稱質量。頸部、胸部去毛，消毒，保定，頸部中線切開皮膚，找到胸腺，將頸部皮膚固定在特制手術臺上，涂以鏡油，增設底部光源，在微循環觀察儀下觀察血管走向，血流狀態等。觀察過程中用３７℃林格氏液保溫保濕。

3）墨汁灌注透明標本制作：灌注液：質量濃度為００５ｇ／ｍＬ的明膠墨汁（加入體積分數為２％的甲醛）。動靜脈透明標本制作：活體觀察結束后，在胸腔入口從頸總動脈和靜脈灌入含抗凝劑的生理鹽水沖洗血管，再灌入１０ｍＬ體積分數為１０％的甲醛，隨后立即將灌注液緩慢并保持一定壓力地灌入。灌注后結扎血管，取下胸腺，然后泡入體積分數為１０％甲醛中固定１～２ｄ。胸腺微血管透明標本制作：固定后的胸腺用體積分數為１０％的Ｈ２Ｏ２漂白１～２ｄ，光照催化，漂白后用流水洗凈。使用經典的冬青油透明法透明：梯度脫水方法參照解剖學試驗技術，取出標本后切成約１５０μｍ的透明厚片，浸泡在冬青油中用解剖顯微鏡觀察。

4）蘇木精：－伊紅染色切片制作常規ＨＥ染色。

5）圖像觀察及處理：從每組制得的胸腺切片中隨機抽取１０張，在顯微鏡下于每張切片上隨機選擇５個視野，利用圖像分析系統，測定小葉間動、靜脈直徑，各級毛細血管直徑和微血管面積密度，前３者每個視野測定４個值，再取其平均值。

6）數據統計：分析統計結果均用ｘ?±ＳＤ表示，各統計結果均采用ＳＰＳＳ１７０進行分析。單因素方差分析采用Ｏｎｅ?ｗａｙＡＮＯＶＡ模塊，組間比較采用ＬＳＤ法。

結果與分析

1.胸腺微循環觀察

1)雞胸腺血管供應：試驗觀察到雞的胸腺位于頸部氣管兩側皮下，與頸淺靜脈、迷走神經、迷走動脈等包在同一個筋膜鞘內。左右各７葉，共１４葉，顏色粉紅（甲醛固定后顏色呈灰白）。胸腺的主要血液供應來自于迷走動脈，這是一條起自頸總動脈干的細小分支，分布至頸部內臟和頸中段的被皮，沿途再分支為胸腺供應血液。迷走動脈上升至顱底與枕動脈發出的降支吻合。流出左右兩側胸腺的靜脈分別匯入左右頸靜脈，在胸腔入口處與鎖骨下靜脈匯合成左右前腔靜脈。流出胸腺的靜脈，有的直接匯入頸淺靜脈，有的則匯入到從皮膚收集靜脈血液的分支中，再并入頸淺靜脈。

2)微循環動態觀察：本試驗雞的胸腺平均厚度為２６ｍｍ，通過活體微循環顯微鏡觀察到胸腺小動脈、分支毛細血管、網狀毛細血管、小靜脈等（圖２Ａ）。微血管管徑粗細不一（圖２Ｂ）。常能觀察到血管的吻合支（圖２Ｃ）及微血管的線流、粒流和線粒流（圖２Ｄ）。細動脈分支形成毛細血管，管徑細（約４～６μｍ），走行長而直，形狀剛健，血流快。分支毛細血管注入網狀毛細血管，互相交聯，走行彎曲，網狀毛細血管管徑較分支毛細血管粗（約５～８μｍ），血流較慢，匯集入集合毛細血管。集合毛細血管管徑較粗（約８～１２μｍ），走行彎曲，外觀柔軟，途徑長短不一，血流較網狀毛細血管快，注入細靜脈（圖２Ａ，２Ｂ，２Ｅ）。

3)雞胸腺組織結構觀察：ＨＥ染色切片觀察到每葉胸腺的被膜結締組織向腺體內發出許多膈，將胸腺分隔成許多小葉，血管隨其進入胸腺內。每個小葉可分為皮質和髓質（圖３Ａ）。皮質濃染而髓質淡染，雞胸腺中不易找到像哺乳動物那樣典型的胸腺小體。試驗雞未經放血處理，胸腺中血管內仍留有紅細胞，易于觀察血管大致位置。管徑較大的血管主要分布在小葉間和皮髓質交界處，在皮質中毛細血管密度明顯大于髓質中毛細血管密度（圖３Ｂ）。

4)雞胸腺的微血管分布：試驗結果顯示來自頸總動脈分支的迷走動脈，與頸淺靜脈、迷走神經和胸腺鏈包裹在同一筋膜鞘中，沿途分支的主干供給頸部皮膚上的血管，發出小分支到胸腺的中央部位，進而分支成血管樹穿透實質形成毛細血管網。每個獨立的胸腺小葉有２條動脈分布。逐漸分支的小動脈沿著皮髓質交界處，注入到皮質和髓質的毛細血管中。而另一類皮質動脈，進入胸腺后，其分支到皮質的毛細血管中。也發現一些發卡狀的小動脈，起源于髓質動脈，并且供應皮質的毛細血管，在動脈和靜脈血管之間起到通路作用（圖４Ａ）。觀察發現皮質中的毛細血管比髓質中的分布更為稠密（圖４Ｂ）。皮質小動脈呈放射狀從皮髓質交界處向外皮層延伸，并匯入到皮質邊緣的小靜脈中。在外皮層，許多皮質小動脈呈現螺旋、彎曲狀（圖４Ｃ），也流通到皮質表面的小靜脈中。但髓質小動脈則形成毛細血管網絡，與靜脈連通（圖４Ｄ）。胸腺中靜脈系統：髓質比皮質中的分布更密（圖４Ｄ）。在胸腺髓質，尤其是皮髓質交界處，常常觀察到彎曲迂回的小靜脈（圖４Ｂ）。這些小靜脈起源于皮質或髓質，形成髓質靜脈，并與小葉間靜脈連接。這些靜脈的血管內皮表面，能夠觀察到淋巴細胞穿透內皮細胞層（圖４Ｅ）。在胸腺表面上，許多皮質的靜脈收集了皮質中毛細血管的血流，并匯入到小葉間靜脈（圖４Ｆ）。這些皮質靜脈多數與穿過皮質隔或實質的髓質靜脈匯合或吻合。皮質的血管不存在血管周圍間隙。

討論與結論

1.關于本試驗所采用的微循環研究方法

本試驗主要選用了組織切片和灌注墨汁的方法進行形態學研究，用活體微循環觀察儀進行生理學研究。鏡下觀察組織切片方法，可以了解微血管的斷面形態、結構，能夠觀察微血管和其周圍組織的關系。但一般組織切片僅能反映約５μｍ厚的斷面結構，不能了解微血管立體分布、走行。為了補救組織切片方法的缺陷，可以采用連續切片，逐片觀察、描繪、復制的方法。這種方法，除具有組織切片方法的優點外，又能描繪出微血管的立體分布、走行和相互關聯。早期的研究利用這種方法認識了一些臟器，如脾臟等的微血管的分布形態。但也存在著工作量過大，缺少真實感等缺陷。因而在本試驗中，選用灌注墨汁后制作透明標本的方法彌補了組織切片觀察的片面性。在血管中注入墨汁充盈微血管，再將組織透明，便可以在解剖鏡下清晰地觀察到微血管的分布、形態以及微血管的相互關系。理想的血管內灌注液應具備接近血液的黏稠度和較好的流動性。試驗采用質量濃度為００５ｇ／ｍＬ明膠墨汁。灌注后選用冬青油與苯甲酸甲酯混合液透明組織，透明效果好。胸腺浸泡在透明液中，在解剖鏡下能清晰、直觀地觀察到微血管的分布、走行、形態，以及細動脈、毛細血管、細靜脈的相互關系等。試驗證明，這種傳統的墨汁灌注透明法操作簡單、所需的設備普通常見，不失為一種比較實用的微循環形態學研究方法。試驗采用活體微循環顯微儀進行直接的活體微循環觀測。本試驗在原有的顯微鏡落射光源的基礎上，在底部添加透射能力強、亮度大的冷光源，能較為清晰地觀察到血流動態，轉動微調時，能觀察到不同高低層次的微血管。但動物不可能完全地安靜，試驗中，觀測部位在雞的頸部，雞只的呼吸活動等會對活體觀察造成影響，不容易得到清晰連貫的微循環錄像，這也是本試驗所欠缺的地方。總的來說，本試驗從宏觀到微觀，從靜態到動態比較詳細地觀察了雞胸腺微循環。