一、方法與結(jié)果

1、植物形態(tài)

多年生草本，高30~80cm。開(kāi)花植株鱗莖直徑大多在1cm以上。葉對(duì)生，有的中部兼3~4枚輪生或散生，條形至條狀披針形，長(zhǎng)5~10cm，寬3~7?~12?mm，先端有的稍彎曲。花單朵，每花有3枚葉狀苞片，苞片先端有時(shí)梢彎曲，但不卷曲；花被片6，長(zhǎng)3~4cm，綠黃色，在開(kāi)花后期顏色會(huì)略有加深，無(wú)方格斑，通常僅在花被片先端近兩側(cè)邊緣有紫色斑帶；外輪3片狹倒卵狀矩圓形，寬9~12mm，先端渾圓；內(nèi)輪3片近匙形，上部寬12~17mm，基部寬3~5mm，先端驟凸而鈍，蜜腺窩幾不凸出或稍凸出；花藥近基著，花絲通常具小乳突；花柱分裂部分長(zhǎng)3~4mm。蒴果長(zhǎng)1.8~2.5cm，棱上的狹翅寬0.5~2mm。花期5~6月，果期6~7月。

1、性狀鑒定照

2010年版中國(guó)藥典川貝母項(xiàng)下性狀及附錄Ⅱ項(xiàng)下藥材、飲片取樣法和檢定通則進(jìn)行。

2、顯微鑒定照

2010年版中國(guó)藥典川貝母項(xiàng)下鑒別及附錄Ⅱ項(xiàng)下顯微鑒別法進(jìn)行。不同品種來(lái)源的川貝母顯微特征存在差異：暗紫貝母?松貝、青貝?垂周壁可見(jiàn)細(xì)小點(diǎn)狀角質(zhì)栓，可見(jiàn)螺紋或環(huán)紋導(dǎo)管；各種規(guī)格太白貝母均無(wú)角質(zhì)栓，并偶見(jiàn)網(wǎng)紋導(dǎo)管。

3、浸出物測(cè)定

按照2010年版中國(guó)藥典一部附錄XA項(xiàng)下水溶性浸出物測(cè)定法的熱浸法和醇溶性浸出物測(cè)定法的熱浸法進(jìn)行測(cè)定。

4、總皂苷含量測(cè)定各取樣品粉末約5.0g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇150mL回流提取8h，回收濃縮至30mL，冷卻，加入乙醚100mL混勻，密塞，靜置過(guò)夜，傾出上清液，沉淀用乙醚20mL洗滌后用60mL甲醇加熱溶解，用干燥濾器濾過(guò)，濾液再加入乙醚100mL，密塞，靜置過(guò)夜，傾出上清液，用干燥濾器濾于燒杯中，揮干大部分溶劑，然后轉(zhuǎn)移至稱量瓶中，于50oС下在干燥箱中干燥至恒重，稱重，得樣品中皂苷的含量。

5、總生物堿含量測(cè)定

（1）對(duì)照品溶液的制備：取西貝母堿對(duì)照品適量，精密稱定，加三氯甲烷制成每1mL含0.80mg的溶液，即得。

（2）供試品溶液的制備：取樣品粉末?過(guò)三號(hào)篩?約2.0g，精密稱定，置100mL圓底燒瓶中，加濃氨試液3mL，浸潤(rùn)1h，加三氯甲烷-甲醇?4:1?混合溶液40mL，置65~70oС水浴加熱回流4h，放冷，濾過(guò)，濾液置50mL量瓶中，用適量三氯甲烷-甲醇?4:1?混合溶液洗滌藥渣2~3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇混合溶液至刻度，搖勻，得供試品三氯甲烷-甲醇溶液。精密量取25.0mL，置100mL錐形瓶中，水浴上揮干溶劑，加入氯仿20.0mL溶解，加水15.0mL，密塞，劇烈振搖3min后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，放置10min。分取下層三氯甲烷液，過(guò)濾，即得。

（3）測(cè)定法：精密吸取三氯甲烷液10mL，置25mL量瓶中，精密加水5mL、再精密加0.04%溴鉀酚綠緩沖液2mL，密塞，超聲3min，劇烈振搖后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，放置30min。分取三氯甲烷層，過(guò)濾，精密吸取三氯甲烷液5.0mL，置已加入0.001mol/L氫氧化鉀無(wú)水乙醇溶液1.0mL的10mL量瓶中，搖勻，以搖勻的三氯甲烷?5.0mL?+0.001mol/L氫氧化鉀無(wú)水乙醇溶液?1.0mL?為空白，照紫外可見(jiàn)分光光度法，在618nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。計(jì)算未水解樣品中生物堿含量，按下面公式計(jì)算藥材中生物堿的含量：生物堿含量=未水解測(cè)得的生物堿量/樣品重量。

（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL，置25mL量瓶中，分別補(bǔ)加三氯甲烷至10mL，按“2.6.3”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=1.6802X+0.0002，r=0.9991。

（5）生物堿苷的含量測(cè)定：另精密量取供試品三氯甲烷-甲醇溶液25.0mL，置100mL錐形瓶中，揮干溶劑，加入0.5mol/L的硫酸溶液10.0mL溶解，于沸水上水浴水解10h，冷卻后加入2.0mol/L的氫氧化鈉溶液4.5mL，濃氨水1mL調(diào)節(jié)pH值至堿性，用三氯甲烷萃取3次，每次8.0mL，合并三氯甲烷層至25.0mL量瓶中并用三氯甲烷定容至刻度，用20mL蒸餾水洗滌三氯甲烷層，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，放置30min。分取下層三氯甲烷液，過(guò)濾，精密吸取三氯甲烷液5~10mL，置25mL容量瓶中，分別補(bǔ)加三氯甲烷至10.0mL，精密加水5mL、再精密加0.04%溴鉀酚綠緩沖液2mL，密塞，超聲3min，劇烈振搖后，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，放置30min。分取三氯甲烷層，過(guò)濾，精密吸取三氯甲烷液5.0mL，置已加入0.001mol/L氫氧化鉀無(wú)水乙醇溶液1.0mL的10mL量瓶中，搖勻，以搖勻的三氯甲烷?5.0mL?+0.001mol/L氫氧化鉀無(wú)水乙醇溶液?1.0mL?為空白，照紫外可見(jiàn)分光光度法，在618nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。計(jì)算水解后樣品中生物堿含量，計(jì)算藥材中生物堿苷的含量：生物堿苷含量=1.379×［?水解后測(cè)得的生物堿量未水解測(cè)得的生物堿量?/樣品重量］。

二、結(jié)論

太白貝母栽培品與野生品相比，前者開(kāi)花期植株生長(zhǎng)高度較整齊，后者開(kāi)花期植株高矮差距大；野生鱗莖較光潔，栽培品體表欠光滑，基部隘縮。顯微特征上各種商品規(guī)格太白貝母均無(wú)角質(zhì)栓，與李萍等研究結(jié)果一致，均符合2010年版中國(guó)藥典一部川貝母鑒別項(xiàng)下的規(guī)定。太白貝母水溶性浸出物總體略高于暗紫貝母，部分商品規(guī)格太白貝母水溶性浸出物含量顯著高于暗紫貝母。水溶性浸出物結(jié)果表明，暗紫貝母的含量與其大小成反比，即松貝明顯高于青貝；而太白貝母的含量與其大小成正比，即花生大貝、大尖等較大者明顯高于松尖、小尖等。鑒于川貝母水溶性浸出物含量明顯高于醇溶性浸出物含量，且水溶性浸出物為其重要的活性部位之一，因此有必要增加川貝母藥材的常規(guī)理化試驗(yàn)項(xiàng)目，加強(qiáng)藥材綜合質(zhì)量控制，建議2015年版中國(guó)藥典增加川貝母水溶性浸出物的含量限度。通過(guò)本試驗(yàn)結(jié)果，其限度建議為川貝母的水溶性浸出物?熱浸法?不得少于9.0%。

三、討論

目前研究表明，川貝母皂苷具有顯著的鎮(zhèn)咳、祛痰等生物活性，為其主要的有效部位之一。總皂苷的含量無(wú)顯著性差異，含量范圍較為穩(wěn)定，可作為川貝母質(zhì)量控制的方法之一。因此皂苷類是否更能代表川貝母的藥效特色，進(jìn)而在選擇川貝母“指標(biāo)成分”時(shí)加以足夠的重視，都是值得思考的。但與趙德永等研究結(jié)果不一致，可能為品種、產(chǎn)地、環(huán)境因素、采收期、生長(zhǎng)年限等原因所致，故需結(jié)合更多樣本對(duì)川貝母總皂苷含量的評(píng)價(jià)進(jìn)行深入研究。傳統(tǒng)認(rèn)為，生物堿是川貝母的主要有效成分之一，是貝母類藥材及成藥的常用檢測(cè)指標(biāo)，松貝是川貝母中品質(zhì)最佳的品種，其生物堿含量按理應(yīng)較高。而本試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果卻表明，太白貝母栽培品各規(guī)格均顯著高于松貝，該測(cè)定結(jié)果與以往文獻(xiàn)研究結(jié)果相吻合，表明太白貝母所具有的含較高總生物堿的特性是其特有的生物學(xué)特性。生物堿含量隨藥材的大小增加而增加，但生物堿苷、總生物堿含量隨藥材的大小增加反而有下降的趨勢(shì)，可能與太白貝母的生長(zhǎng)年限有關(guān)，因太白貝母鱗莖的產(chǎn)量則是隨著生長(zhǎng)年限的增加而增加、生物堿含量隨生長(zhǎng)年限先升高而降低。這一結(jié)果意味著，能代表川貝母商品規(guī)格的藥效特色不僅有生物堿類成分，而且可能是其他類型成分的綜合作用，需結(jié)合藥理、藥效和臨床應(yīng)用來(lái)對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的研究。太白貝母所表現(xiàn)出的浸出物含量、總皂苷含量、生物堿含量與暗紫貝母明顯相似并高于暗紫貝母，為太白貝母可完全代替川貝母提供了可靠的物質(zhì)基礎(chǔ)。川貝母藥材傳統(tǒng)以松貝為優(yōu)，多以野生藥材入藥，但從本實(shí)驗(yàn)的研究數(shù)據(jù)來(lái)看，在太白貝母列入川貝母后，傳統(tǒng)的川貝母“以松貝為優(yōu)”的評(píng)價(jià)有待一步探討。

作者：沈力 周濃 付紹智 易東陽(yáng) 賈晗 陳洪源 吳應(yīng)梅 單位：重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校 重慶三峽學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院