傷寒桿菌檢測實驗方法的研討

　　傷寒是由傷寒桿菌經消化道侵入而引起的急性傳染病，遍布于世界各地，以熱帶、亞熱帶地區為多見，在我國和其他發展中國家仍是一種常見的傳染病.。傷寒桿菌經口腔到消化道侵害小腸粘膜而入血，可造成傷寒桿菌菌血癥。傷寒病常稱“傷寒熱”， 其癥狀包括高燒，可達39°至40°C，其他癥狀有腹痛、嚴重腹瀉、頭痛、身體出現玫瑰色斑等。其中腸道出血或穿孔是其最嚴重的并發癥，其傳染途徑為糞口途徑，傳染力很高。所以，傷寒的早期診斷十分重要。現對我中心使用的傷寒桿菌檢測實驗方法研討如下。

　　1材料和方法

　　1.1材料：選取送檢傷寒患者137例，其中男性77例，女性60例。年齡8—63歲，平均38歲。

　　1.2檢測方法：

　　1.2.1血清學檢測：肥達試驗是臨床上常用于輔助診斷傷寒的傳統方法。其原理是用傷寒桿菌的菌體(O)抗原和鞭毛(H)抗原以及副傷寒甲、乙、丙菌液與稀釋的待測血清反應，根據凝集效價判斷血清中有無傷寒桿菌的抗體。早期肥達試驗需要急性期和大約間隔10天的康復期血清，兩份標本之間抗O抗體或抗H抗體滴度升高4倍，更有診斷意義。傷寒桿菌的 O抗原與A群、B群沙門氏菌有部分相同抗原，與甲、乙兩種副傷寒桿菌有一定的交叉反應，因此，肥達反應診斷傷寒桿菌常出現假陽性，特異性差，敏感性低，而且抗原抗體結合出現凝集沉淀常需要20 h以上。

　　1.2.2免疫學檢測：①酶聯免疫吸咐試驗(ELISA)：根據抗原或抗體特異性免疫反應原理設計，將已知的抗原或抗體結合在某種固相載體上，以辣根過氧化酶為指示劑，標記在另一種抗原或抗體上，加入酶作用底物，酶與底物發生反應后，底物顯色，根據底物顯色的深淺定性或定量地檢測樣本中的抗體或抗原。②浸染試驗(Dipstick assay)：又稱快速試紙法，是近些年發展起來的一種用膠體金作指示劑的快速診斷方法。基本原理是先將特異性的抗原或單克隆抗體固定于試紙條(硝酸纖維薄膜)的一端，檢測時將試紙條的另一端浸入待測樣品，由于毛細管作用，樣品液向前移動，如待測樣品中含有相應的抗體或抗原，則當樣品液移至固定有抗原或抗體區時會發生特異性結合，在顯色系統的作用下，該區域出現一定的顏色。此法具有操作簡單，不需任何儀器，20 min即能報告結果，適合現場查病時使用。浸染試驗在特異性、敏感性、簡單、快速方面優于常規方法。

　　1.2.3聚合酶鏈反應(PCR)：PCR是一種體外DNA擴增技術，其基本原理是酶促DNA合成反應，即在模板DNA、引物和脫氧核糖核酸存在及DNA聚合酶的作用下，使DNA鏈擴增。它由變性—退火—延伸三個基本反應步驟構成，是現階段檢測傷寒桿菌的最快速準確的方法。①套式聚合酶鏈反應：又稱二次PCR，在這種技術中，首先用一對外引物進行第一輪PCR，然后再使用第一對引物擴增的DNA序列內部的一對引物再次擴增。②一次PCR：只設計一對引物用于PCR即完成檢測，但一次PCR檢測臨床血標本容易受到血中大量存在的外周單個核細胞DNA非特異性擴增的影響而使敏感性降低。③多重PCR：多重PCR是在同一個反應管中同時完成多個不同基因擴增的PCR。(4)免疫磁珠分離PCR：免疫磁珠就是將直徑0.05 μl～4 μl具有超順磁性的微粒表面經化學修飾，使之與特異性抗體牢固結合，成為能與特異性抗原結合且有磁性的磁珠。

　　2結果

　　經過我中心對傷寒桿菌檢測，132例患者得到了準確的診斷，并且進行了對癥治療;5例患者檢測結果不準確，仍需臨床進一步觀察再送檢確診。

　　3討論

　　傷寒患者的診斷主要依據病原學的實驗室診斷，由于抗生素的廣泛應用，導致血培養時傷寒桿菌的檢出率明顯降低，常規血清學檢測患者血清中的特異性抗體，其特異性和敏感性均存在一定的問題，從而影響檢測結果的準確性和可靠性。肥達氏試驗早期陽性率低，需到第3周、第4周才可達70%，實際上只有回顧性診斷價值，且假陽性較高。免疫學檢測的方法具有靈敏度高、特異性好，反應時間短，操作簡便，結果易于判斷等特點，較肥達氏試驗特異、敏感和快速，且價格低廉，一般實驗室都能開展，易于普及推廣，適用于傷寒的早期診斷，具有較高的臨床價值。PCR技術檢測傷寒桿菌的方法敏感度更高，但是這類方法操作麻煩、對環境要求較高，且價格昂貴，很難普及。

　　檢測傷寒桿菌的方法很多，各有其優缺點，傷寒桿菌的檢測方法將向早期、快速、準確、靈敏、特異等方向發展，特別是免疫學檢測方法、PCR等現代分子生物學技術的聯用，會使傷寒桿菌的檢測方法日趨成熟，為臨床診斷提供更加快速準確的科學診斷依據。