HLA-Ⅱ類(lèi)基因與狼瘡性器官系統(tǒng)損害

　　摘　要　目的　分析HLA-Ⅱ類(lèi)基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)從基因到臨床表達(dá)的發(fā)病機(jī)制。方法　應(yīng)用PCR-SSOPH技術(shù)檢測(cè)113例確診SLE病人的DR、DQA1、DQB1等位基因。結(jié)果　漿膜炎與DQB1*0601正相關(guān);神經(jīng)精神癥狀與DRB1*1501正相關(guān);血肌酐增高與DQB1*0302、DQB1*0401正相關(guān);血尿素氮增高與DQB1*0201負(fù)相關(guān);蛋白尿與DQB1*0301、DRB3*0202、DRB3*0301、DRB1*1101負(fù)相關(guān);血尿與DQB1*0301、DRB3*0301負(fù)相關(guān);管型尿與DRB1*0302正相關(guān);貧血和白細(xì)胞減少分別與DQB10201正相關(guān);血小板減少與DRB1*1502和DRB1*1202正相關(guān);淋巴細(xì)胞減少與DRB1*0302正相關(guān);C3降低與DQB1*0303正相關(guān)，與DQB1*0301負(fù)相關(guān);狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性與DRB1*1501負(fù)相關(guān)。結(jié)論　多個(gè)HLA-Ⅱ類(lèi)等位基因和SLE的臨床表達(dá)有相關(guān)性，國(guó)人的SLE遺傳背景與其他人種有所不同。

　　關(guān)鍵詞：紅斑狼瘡，系統(tǒng)性;HLA抗原;多態(tài)現(xiàn)象(遺傳學(xué));易感性與特異性;等位基因

　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)發(fā)病與多種HLA等位基因相關(guān)。為深入探討這些基因或其關(guān)聯(lián)的亞型與SLE臨床表達(dá)關(guān)系，我們引入PCR-SSOPH檢測(cè)技術(shù)，對(duì)113例確診的SLE病人進(jìn)行HLA-DR、DQ位點(diǎn)等位基因分型，分析基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，找出重型SLE相關(guān)基因。

　　1　資料與方法

　　1.1　病例選擇：入選的113例患者均符合1982年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)4條或4條以上[1]。記錄患者的性別、發(fā)病年齡，以及有無(wú)以下SLE臨床表現(xiàn)：蝶型紅斑、盤(pán)狀損害、光敏、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象、狼瘡發(fā)、神經(jīng)精神癥狀、漿膜炎、血細(xì)胞減少、狼瘡腎炎和C3降低(<0.8 g/L)等。

　　標(biāo)本：外周靜脈血5 ml(抗凝)。

　　1.2　實(shí)驗(yàn)方法：①基因組DNA的提取：鹽析法。②DNA體外擴(kuò)增—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。共有6對(duì)引物，其中AMP-B為DR位點(diǎn)擴(kuò)增的公用引物。③地高辛(DIG)—ddUTP3′末端標(biāo)記寡核苷酸探針雜交。

　　1.3　分型標(biāo)準(zhǔn)：以顯著影響生存率的惡性指標(biāo)作為重型SLE分型標(biāo)準(zhǔn)[2]。

　　1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：χ2相關(guān)分析、多因素回歸分析和多項(xiàng)比較校正，以P<0.05為具統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。

　　2　結(jié)　　　果

　　2.1　HLA-Ⅱ類(lèi)基因分型

　　2.1.1　等位基因分型結(jié)果：用12個(gè)DQA1探針檢出7個(gè)亞型，未檢出DQA1*0401;用15個(gè)DQB1探針檢出12個(gè)等位基因，未檢出DQB1*0504、*0603和*0604;用4個(gè)DR2探針檢出4個(gè)亞型：用4個(gè)DR52組探針檢出3個(gè)亞型，未檢出DRB3*0201;用8個(gè)DR52相關(guān)組探針?lè)殖?個(gè)亞型。

　　2.1.2　H-W吻合度檢測(cè)結(jié)果：在HLA-DQA1和DQB1座位上，基因型的期望值與觀察值很好吻合，分別P>0.1和P>0.5，說(shuō)明基因已達(dá)到遺傳平衡，本組病人可作為可靠的供研究的群體資料。

　　2.2　HLA-Ⅱ類(lèi)等位基因與SLE器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性(見(jiàn)表1)

　　2.2.1　HLA-DQA1位點(diǎn)等位基因：DQA1*0101與淋巴細(xì)胞減少正相關(guān);DQA1*0102與狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性負(fù)相關(guān);DQA1*0501與蛋白尿負(fù)相關(guān)，Pc(多項(xiàng)比較校正P值)>0.05。

　　2.2.2　HLA-DQB1位點(diǎn)等位基因：HLA-DQB1*0201與貧血和白細(xì)胞減少正相關(guān)，與血尿素氮增高負(fù)相關(guān);DQB1*0302與血肌酐增高正相關(guān);DQB1*0303與C3降低正相關(guān);DQB1*0401與血肌酐增高正相關(guān);DQB1*0602與發(fā)病年齡正相關(guān)，均分別P<0.05，Pc>0.05。

　　DQB1*0301分別與蛋白尿和血尿負(fù)相關(guān)，分別P<0.001和0.01，分別Pc<0.05和Pc>0.05;與C3降低負(fù)相關(guān)，分別P<0.05和Pc>0.05。DQB1*0601與漿膜炎正相關(guān)，分別P<0.01，Pc<0.05。

　　2.2.3　HLA-DR2組等位基因：DRB1*1501與神經(jīng)精神癥狀正相關(guān)，與狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性負(fù)相關(guān);DRB1*1502與血小板減少正相關(guān)，均分別P<0.05，Pc>0.05。

　　2.2.4　HLA-DR52組等位基因：DRB3*0202與蛋白尿負(fù)相關(guān);DRB30301與蛋白尿和血尿均呈負(fù)相關(guān)，均分別P<0.05，Pc>0.05。

　　2.2.5　HLA-DR52相關(guān)組等位基因：DRB10302與淋巴細(xì)胞減少和管型尿正相關(guān);DRB1*1101與蛋白尿負(fù)相關(guān);DRB1*1202與血小板減少正相關(guān)，均P<0.05，Pc>0.05。

　　表1　HLA-DR和DQ等位基因與SLE臨床指標(biāo)的相關(guān)性

　　等位基因 臨床指標(biāo) N1/N2 N3/N4 χ2值 P值 Pc值

　　DQA1*0101 淋巴細(xì)胞減少 10/64 16/49 　4.45 0.03+ >0.05

　　DQA1*0102 狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性 15/25 　2/11 　8.04 0.013- >0.05

　　DQA1*0501 蛋白尿 19/69 　5/44 　4.20 0.04- >0.05

　　DQB1*0201 貧血 　　5/51 18/62 　6.38 0.01+ >0.05

　　白細(xì)胞減少 　　8/65 15/48 　6.11 0.01+ >0.05

　　尿素氮增高 16/51 　1/11 　7.00 0.03- >0.05

　　DQB1*0301 蛋白尿 27/69 　3/44 14.39 0.000 1- <0.01

　　血尿 29/90 　1/23 　7.30 0.007- >0.05

　　C3降低 20/51 　9/55 　7.66 0.02- >0.05

　　DQB1*0302 血肌酐增高 　7/55 4/7 　8.84 0.01+ >0.05

　　DQB1*0303 C3降低 10/51 17/55 　8.50 0.01+ >0.05

　　DQB1*0401 血肌酐增高 　1/55 2/7 　8.81 0.01+ >0.05

　　DQB1*0601 漿膜炎 21/99 　8/14 　8.30 0.03+ <0.05

　　DRB1*1501 CNS損害 19/99 　5/13 　6.03 0.049+ >0.05

　　狼瘡細(xì)胞陽(yáng)性 11/25 　0/11 10.96 0.01- >0.05

　　DRB1*1502 血小板減少 　0/55 　6/58 　6.01 0.01+ >0.05

　　DRB3*0202 蛋白尿 19/69 　3/44 　7.36 0.007- >0.05

　　DRB3*0301 蛋白尿 12/69 　2/44 　4.08 0.04- >0.05

　　血尿 14/90 　0/23 　4.08 0.04- >0.05

　　DRB1*0302 淋巴細(xì)胞減少 　1/64 　5/49 　4.12 0.04+ >0.05

　　管型尿 　4/104 2/9 　5.56 0.02+ >0.05

　　DRB1*1101 蛋白尿 11/69 　1/44 　5.29 0.02- >0.05

　　DRB1*1202 血小板減少 　0/55 　5/58 　4.96 0.03+ >0.05

　　注：N1：等位基因陽(yáng)性+臨床指標(biāo)陰性數(shù)，N2：臨床指標(biāo)陰性數(shù)，N3：等位基因陽(yáng)性+臨床指標(biāo)陽(yáng)性數(shù)，N4：臨床指標(biāo)陽(yáng)性數(shù)，-：負(fù)相關(guān)，+：正相關(guān)

　　此外，本研究尚發(fā)現(xiàn)HLA-Ⅱ類(lèi)基因與多種自身抗體顯著關(guān)聯(lián)，但與性別、蝶型紅斑、盤(pán)狀損害、光敏、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象和狼瘡發(fā)無(wú)顯著相關(guān)。

　　2.2.6　多因素回歸分析：結(jié)果表明等位基因相互間存在復(fù)雜的交互關(guān)系，DQB1*0401和DQB1*0605分別與血肌酐增高和蛋白尿正相關(guān)，分別P<0.05。

　　3　討　　　論

　　為探討基因與SLE臨床表達(dá)關(guān)系，找出重型SLE相關(guān)基因，我們進(jìn)一步分析了HLA-Ⅱ類(lèi)基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性。

　　3.1　腎臟損害：Fronek等[3]報(bào)道DR2與狼瘡腎炎相關(guān)，還發(fā)現(xiàn)稀有等位基因DQB1*0605、*0502與白人、黑人和亞洲人狼瘡腎炎顯著相關(guān)，此相關(guān)在亞洲人最顯著。Doherty等[4]報(bào)道了對(duì)南方中國(guó)人SLE的研究結(jié)果：與健康對(duì)照組比，DRw15和DQw1在狼瘡腎炎組頻率顯著增高：與非狼瘡腎炎組比，頻率無(wú)明顯增高;王敏等[5]報(bào)道，DR2和DR9同時(shí)陽(yáng)性可致狼瘡腎炎風(fēng)險(xiǎn)性明顯增高;彭學(xué)標(biāo)等[6]的研究結(jié)果也表明DR2陽(yáng)性與江蘇地區(qū)漢族人SLE腎損害相關(guān);但未見(jiàn)分析DR2亞型相關(guān)性的報(bào)道。我們的研究結(jié)果提示DQB1*0401和DQB1*0302均與血肌酐增高相關(guān);其中DQB1*0401經(jīng)多因素回歸分析保持顯著意義，因此是較為肯定的重型SLE相關(guān)基因;此外，單因素分析結(jié)果未顯示DQB1*0605與腎損害相關(guān)，但多因素回歸分析結(jié)果顯示其與蛋白尿關(guān)聯(lián);由于DQB1*0605是稀有基因，顯然不能用它解釋SLE患者如此高的腎炎發(fā)生率;推測(cè)DQB1*0605與其他更重要的關(guān)聯(lián)基因一起介導(dǎo)狼瘡性蛋白尿的發(fā)生與發(fā)展。我們的研究未發(fā)現(xiàn)單位點(diǎn)DR2等位基因與腎損害關(guān)聯(lián)，它們是否通過(guò)與其他基因的組合而致腎炎易感，有待進(jìn)一步研究。

　　本資料還顯示DQB1*0303與C3降低正相關(guān)。C3在自身免疫反應(yīng)過(guò)程中起關(guān)鍵性作用，對(duì)腎炎的發(fā)生與發(fā)展尤為重要，早期C3降低是獨(dú)立影響SLE病人預(yù)后的惡性因素[2]。因此DQB1*0303是個(gè)重要的SLE相關(guān)基因，值得進(jìn)一步探討它對(duì)SLE的標(biāo)記性。

　　本研究發(fā)現(xiàn)某些等位基因?qū)钳從I炎具有保護(hù)性，包括DQB1*0201和*0301，分別與血尿素氮和蛋白尿負(fù)相關(guān);其中DQB1*0301還與惡性指標(biāo)C3降低負(fù)相關(guān);文獻(xiàn)[7]報(bào)道DQB1*0301與SLE易感相關(guān)，但它可能是中國(guó)南方漢族人輕型SLE相關(guān)基因。

　　此外，DRB3*0202(DRw52b)、*0301(DRw52c)也與蛋白尿負(fù)相關(guān)。這與Reveille等[8]報(bào)道的美國(guó)黑人DRw52b與狼瘡腎炎高風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)相反。這種差異顯然與人種的遺傳背景有關(guān)。我們推測(cè)DR52組等位基因單獨(dú)不能決定狼瘡腎炎，但它們與重要的狼瘡腎炎相關(guān)基因呈連鎖不平衡，通過(guò)組合而呈現(xiàn)不同的功能：與致腎炎基因連鎖，功能顯示致病性;與保護(hù)性基因連鎖，顯示保護(hù)性。

　　孟煒等[9]報(bào)道DQA1*0501是SLE的保護(hù)基因，本資料也提示DQA1*0501與狼瘡腎炎低風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。這與國(guó)外報(bào)道DQA1*0501為SLE易感基因不一致。

　　我們先前生存率的研究結(jié)果顯示男性是獨(dú)立影響SLE病人預(yù)后的惡性因素，男性比女性更多出現(xiàn)管型尿[2]。但本研究未發(fā)現(xiàn)HLA-Ⅱ類(lèi)基因在男女性之間的分布有差異。在鼠狼瘡，Yaa基因(Y染色體自身免疫反應(yīng)促進(jìn)基因)可顯著加速狼瘡易感鼠發(fā)病[10]，且狼瘡腎炎嚴(yán)重;在人狼瘡，是否存在具有類(lèi)似功能的基因，值得深入探討。

　　3.2　中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害：本研究發(fā)現(xiàn)DRB1*1501與SLE患者的神經(jīng)精神癥狀正相關(guān)，這在國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)有報(bào)道。Reveille等[8]的研究結(jié)果提示3.7 kb I DQαRFLP片斷與黑人SLE的神經(jīng)精神癥狀負(fù)相關(guān)，并推測(cè)具有保護(hù)功能的序列在DQα分子鏈上。本研究結(jié)果未能支持這一論點(diǎn)。

　　3.3　血液系統(tǒng)損害：DQA1*0101與淋巴細(xì)胞減少相關(guān)，未見(jiàn)其他可比性資料供討論。DQB1*0201與貧血和白細(xì)胞減少關(guān)聯(lián)。值得注意的是DQB1*0201同時(shí)與血尿素氮增高呈強(qiáng)負(fù)性關(guān)聯(lián)，表明該基因主要引起血液系統(tǒng)損害。臨床上某些SLE病人以血液系統(tǒng)受累為主要表現(xiàn)，如嚴(yán)重貧血、血小板減少等，而其他系統(tǒng)損害輕或無(wú)，可能與攜帶DQB1*0201基因型有關(guān)。

　　3.4　漿膜炎：本研究結(jié)果顯示DQB1*0601與漿膜炎正相關(guān)，是重型SLE相關(guān)基因。文獻(xiàn)[1]報(bào)道DQB1*0601是SLE易感基因。

　　本文研究分析HLA-Ⅱ類(lèi)基因與狼瘡性器官、系統(tǒng)損害的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)DR和DQ位點(diǎn)均有多個(gè)等位基因與SLE臨床指標(biāo)關(guān)聯(lián)，部分顯示易感性，部分顯示保護(hù)性。結(jié)果對(duì)區(qū)分SLE臨床亞型，早期預(yù)測(cè)SLE發(fā)展趨勢(shì)具有一定的參考意義。研究結(jié)果表明，重型SLE相關(guān)基因主要為DQA1*0101、DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0303、DQB1*0401、DQB1*0601和DRB1*1501，對(duì)SLE具有保護(hù)性作用的基因包括DQA1*0501、DQB1*0301、DRB3*0202和DRB3*0301等。

　　謝尚葵現(xiàn)為美國(guó)德克薩斯大學(xué)西南醫(yī)學(xué)中心風(fēng)濕病科博士后

　　作者單位：謝尚葵(200040 上海醫(yī)科大學(xué)華山醫(yī)院皮膚科)

　　馮樹(shù)芳(200040 上海醫(yī)科大學(xué)華山醫(yī)院皮膚科)

　　沈福民(上海醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院遺傳流行病學(xué)教研室)

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